产品货号：
BTN15-27110
中文名称：
人类嗜T淋巴细胞病毒1型(HTLV-1)前病毒荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
HTLV-1 Provirus Probe PCR Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是一种基于探针法荧光定量PCR法检测HTLV-1前病毒DNA的试剂盒。
人类嗜T淋巴细胞病毒1型(Human T-lymphotropic Virus 1，HTLV-1)是一种感染后可导致血癌或其他转移癌的RNA病毒，在体内主要感染CD4+ T淋巴细胞，可引起成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、HTLV-I相关脊髓病(HTLV-1 associated myelopathy)，HAM/热带痉挛性下肢瘫(TSP)及色素层炎(uveitis)，主要通过输血、针头、性行为、母子传染。患者的白血病细胞内有HTLV前病毒DNA的整合，所以HTLV-I前病毒DNA水平可以作为病毒载量之外的另一标志物。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
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人类嗜T淋巴细胞病毒1型(Human T-lymphotropic Virus 1，HTLV-1)是一种感染后可导致血癌或其他转移癌的RNA病毒，在体内主要感染CD4+ T淋巴细胞，可引起成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、HTLV-I相关脊髓病(HTLV-1 associated myelopathy)，HAM/热带痉挛性下肢瘫(TSP)及色素层炎(uveitis)，主要通过输血、针头、性行为、母子传染。患者的白血病细胞内有HTLV前病毒DNA的整合，所以HTLV-I前病毒DNA水平可以作为病毒载量之外的另一标志物。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据HTLV-1前病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。
- 本制品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 本制品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1.5mL |
| 超纯水 | 1.5mL |
| HTLV-1前病毒PCR引物-探针混合液 | 100μL |
| HTLV-1前病毒阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以101～106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2，1。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在4号管中加入5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟核酸纯化试剂盒所要求的起始样品体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数基因组DNA提取试剂盒兼容。也可以使用本公司的核酸释放剂。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管标准曲线样品管
(1～6管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL HTLV-1前病毒PCR引物-探针混合液 3μL 3μL 各3μL N+2个待测样品DNA模板 7μL 不加 不加 超纯水 不加 7μL 不加 第6步所得标准曲线样品稀释液(1～6号) 不加 不加 各7μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5min PCR反应
(45个循环)95℃ 15sec 45℃ 60sec(采集FAM通道的荧光信号，
淬灭基团为TAMRA)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须为零或者大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于40。对待测样品，如果其Ct为零或大于或等于40则为阴性，如果小于40则为阳性。
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